Methoden
Na goedkeuring van het protocol door de Ethische Toetsingscommissie van het Leids Universitair Medisch Centrum werden 25 gezonde mannelijke en vrouwelijke proefpersonen (leeftijd 18-45 jaar) gevraagd deel te nemen aan dit oriënterende onderzoek. Na het geven van schriftelijke toestemming werden de proefpersonen volledig medisch onderzocht voordat zij aan het onderzoek deelnamen, inclusief een zwangerschapstest voor vrouwen in de vruchtbare leeftijd. Het gebruik van alcohol en xanthine werd beperkt tot twee eenheden per dag, vanaf twee dagen voorafgaand aan de studiedag. Verder onthielden de proefpersonen zich van alcohol, cafeïne en xanthine houdende voedingsmiddelen en dranken 12 uur voorafgaand aan de onderzoeksdagen en tijdens de onderzoeksdagen. Vrouwelijke proefpersonen werden geïnstrueerd om barrière-anticonceptiemiddelen te gebruiken. Gelijktijdige toediening van andere medicatie dan paracetamol was niet toegestaan tijdens de studieperiode.
Dit was een dubbelblind, gedeeltelijk gerandomiseerd, placebogecontroleerd, stijgend doseringsonderzoek van GPI 5693, met een minimale uitloopperiode van 48 uur. De studie was gericht op het bereiken van een maximale concentratie (Cmax) en oppervlakte onder de concentratiecurve (AUC) bij de concentraties die omkering van hyperalgesie laten zien in experimentele diermodellen.
De studie werd uitgevoerd in panels, met tussentijdse analyses van farmacokinetiek en veiligheid om de opzet van opeenvolgende panels aan te passen. Vier mannelijke proefpersonen die deelnamen aan Panel 1 kregen nuchtere orale GPI 5693 doses van 100 mg, 300 mg en 750 mg, waarbij willekeurig een placebo werd ingebracht. Een vijfde open-label studiedag werd aan dit panel toegevoegd om de effecten van voedsel op de dosis van 750 mg te onderzoeken. Na een tussentijdse analyse waren de geselecteerde doses voor panel 2 (dat ook uit vier mannelijke proefpersonen bestond) 300 mg, 750 mg, 1125 mg en placebo. Tussentijdse analyses van de eerste twee panels leverden aanwijzingen op voor een effect van voedsel op de farmacokinetica van GPI 5693. De veiligheid en verdraagbaarheid van het geneesmiddel bij mannen maakten opname van vrouwen in een derde open-label panel mogelijk, waarbij de verdraagbaarheid en farmacokinetiek na eenmalige orale doses van 1125 en 1500 mg in de voedingstoestand voor beide seksen werd onderzocht. Er werden geen CNS-effecten gemeten tijdens Panel 3, dat bestond uit zes vrouwelijke en zes mannelijke proefpersonen.
De oogbewegingsregistratie, adaptief volgen, lichaamsbeweging en Visual Analogue Scales (VAS) werden vóór de eerste studiedag geoefend om leereffecten tijdens het onderzoek te beperken. GPI 5693 werd toegediend als capsules van 100 mg en 375 mg na een nacht vasten. Tijdens alle gelegenheden van de eerste twee panels zonder voedselinteractie werden EEG, oogbewegingen, adaptief volgen, lichaamsbeweging en VAS gemeten op de basislijn en met intervallen van 30 min gedurende de eerste 2 uur, en met toenemende intervallen tot 8 uur na toediening van het geneesmiddel. ECG, vitale functies en ongewenste voorvallen werden regelmatig gecontroleerd en continue twee-afleidingen ECG monitoring werd uitgevoerd gedurende 4 uur na toediening van het geneesmiddel. In de periode van 24-48 uur na de toediening werd een ontlastingsmonster genomen om te controleren op occult bloed. Bloedmonsters voor hematologische en biochemische parameters werden genomen op de basislijn en 24 uur na de toediening van het geneesmiddel. Farmacokinetische monsters werden het eerste uur om de 10 minuten genomen, daarna met toenemende intervallen tot 48 uur na toediening van het geneesmiddel. GPI 5693 werd gemeten door middel van LC/MS/MS. De plasma GPI 5693 concentraties waren lineair van 1 tot 2000 ng ml-1 en de urine GPI 5693 concentraties waren lineair van 10 tot 2000 ng ml-1. De gemiddelde “within assay” CV was 2,5% en de gemiddelde “between assay” CV was 1,6%.
De proefpersonen bleven tot 24 uur na elke dosering op de onderzoekslocatie. Een post-study controle vond plaats 48 uur na hun laatste studiedag met inbegrip van de laatste follow-up van eventuele bijwerkingen.
Electroencephalograms werden opgenomen en geanalyseerd met behulp van CED software (Cambridge Electronics Design, Cambridge, UK), zoals eerder beschreven . EEG opnamen werden gemaakt met zilver-zilverchloride elektroden, gefixeerd met collodium op Fz, Cz, Pz en Oz, met dezelfde gemeenschappelijke aardelektrode als voor de oogbewegingsregistratie (internationaal 10/20 systeem). De weerstanden van de elektroden werden onder 5 kOhm gehouden. Alle opnamen werden verricht met de ogen van de proefpersonen gesloten. EEG-signalen werden verkregen uit de afleidingen Fz-Cz en Pz-Oz. De signalen werden versterkt met behulp van een Nihon Kohden AB-621G bio-elektrische versterker (Nihon Kohden Corporation, Tokyo, Japan) met een tijdconstante van 0,3 s en een laagdoorlaatfilter van 100 Hz. Per sessie werden acht opeenvolgende blokken van 8 s opgenomen over een periode van 2 minuten. De bemonsteringsfrequentie was 1024 Hz. Datablokken die artefacten bevatten, werden bij visuele inspectie geïdentificeerd en van de analyse uitgesloten. Fast Fourier transform analyse werd uitgevoerd om de som te verkrijgen van de amplitudes in de delta- (0,5-3,5 Hz), theta- (3,5-7,5 Hz), alfa (7,5-11,5 Hz) en bèta (11,5-30 Hz) frequentiebereiken. De totale bandbreedte van de opnames was 0-50 Hz.
Opname en analyse van saccadische en vloeiende oogbewegingen werden gedaan met een microcomputer-gebaseerd systeem. De apparatuur die werd gebruikt voor stimulusweergave, signaalverzameling en versterking was van Nihon Kohden (Nihon Kohden Corporation, Tokyo, Japan). Saccadische oogbewegingen werden opgenomen voor stimulus amplitudes van 15 graden naar beide zijden. Interstimulus intervallen varieerden willekeurig tussen 3 en 6 s, en 15 saccades werden opgenomen. De gemiddelde waarden van saccade pieksnelheid, latentie (reactietijd) en onnauwkeurigheid werden gebruikt als parameters. Voor vloeiende oogbewegingen bewoog het doelwit sinusoïdaal met frequenties van 0,3 tot 1,1 Hz, oplopend met stappen van 0,1 Hz. De amplitude van de verplaatsing van het doelwit komt overeen met 20 graden oogbolrotatie naar beide kanten. Voor elke stimulusfrequentie werden vier cycli geregistreerd.
De adaptieve volgtest werd uitgevoerd zoals oorspronkelijk beschreven door Borland en Nicholson , met gebruikmaking van aangepaste apparatuur en software (Hobbs, 2000, Hertfordshire, UK). De gemiddelde prestatie en de standaardafwijking van de scores over een periode van 10 minuten werden gebruikt voor analyse. Adaptief volgen is een achtervolgingsvolgtaak. Een cirkel beweegt willekeurig over een scherm. De proefpersoon wordt geïnstrueerd om te proberen een stip binnen de bewegende cirkel te houden door een joystick te bedienen. Als deze poging slaagt, neemt de snelheid van de bewegende cirkel toe. Omgekeerd wordt de snelheid verlaagd als de proefpersoon de stip niet binnen de cirkel kan houden. De prestaties werden gescoord na een vaste periode van 10 minuten. De adaptieve volgtest is gevoeliger voor beschadiging van de oog-hand coördinatie door drugs dan compensatoire achtervolgingstaken of andere achtervolgingstaken, zoals de achtervolgingsrotor. De adaptieve volgtest is nuttig gebleken voor het meten van de effecten op het CZS van alcohol, diverse psychoactieve drugs en slaaptekort.
Met de lichaamszwaaimeter kunnen lichaamsbewegingen in één vlak worden gemeten, wat een maat is voor de stabiliteit van de lichaamshouding. De lichaamszwaai werd gemeten met een apparaat dat lijkt op de Wright ataxiameter. Met een touwtje aan het middel werden alle lichaamsbewegingen over een bepaalde periode geïntegreerd en uitgedrukt als mm zwaai op een digitale display. De bijdrage van het gezichtsvermogen aan de posturale controle werd geëlimineerd door de proefpersonen te vragen hun ogen te sluiten. De proefpersonen werden geïnstrueerd om bij elke sessie hetzelfde paar comfortabele schoenen met lage hakken te dragen. Voor het begin van een meting werd de proefpersonen gevraagd stil en comfortabel te staan, met hun voeten ongeveer 10 cm uit elkaar en hun handen in een ontspannen positie naast het lichaam. De proefpersonen mochten niet praten tijdens de meting. De totale duur van de metingen bedroeg 2 min
Visual Analogue Scales zoals oorspronkelijk beschreven door Norris werden gebruikt om subjectieve effecten te kwantificeren. Uit deze metingen werden drie factoren afgeleid, zoals beschreven door Bond en Lader , die overeenkomen met alertheid, stemming en kalmte. Psychedelische effecten werden gemeten met behulp van visuele analoge schalen, vertaald uit schalen beschreven door Bowdle et al. , aangezien er geen gevalideerde versie beschikbaar was voor de Nederlandse taal en populatie.
Alle herhaaldelijk gemeten dynamische variabelen werden gekarakteriseerd met behulp van maximale verandering ten opzichte van de waarde voor de behandeling (Emax) en met behulp van gebieden onder de effectcurve (AUECs). Deze AUECs werden berekend met behulp van de lineaire trapeziumregel en werden gedeeld door de overeenkomstige tijdspanne, wat resulteerde in een gewogen gemiddelde uitkomst. Er werden nominale tijden gebruikt. De AUEC’s werden berekend over de gehele bemonsteringsperiode (12 uur) en over de eerste 6 uur, omdat verwacht wordt dat de meeste respons in deze periode optreedt.
Verschrijvende statistieken werden verkregen voor elke farmacodynamische parameter. Zowel het tijdsverloop als de afgeleide parameters werden samengevat (met gebruikmaking van gemiddelden, standaardafwijking (SD), min, mediaan, max, n). Afgeleide farmacodynamische parameters werden ongewijzigd geanalyseerd. EEG-parameters werden geanalyseerd als percentage verandering ten opzichte van de prevalentie. Deze parameters werden geanalyseerd, alleen van de nuchtere gelegenheden, met behulp van variantieanalyses (anova), waarbij rekening werd gehouden met proefpersoon en behandeling.
Dosisonafhankelijke parameters (klaring, Cmax/dosis, AUC0-inf/dosis en tmax) werden vergeleken tussen de nuchtere en de nuchtere gelegenheden met behulp van covariantieanalyses met voedsel en proefpersoon als factoren, dosis als covariaat en met inbegrip van de dosis-voedselinteractie. Dit resulteerde in een voorspeld lineair verband tussen de dosis en de farmacokinetische (PK) parameter voor nuchtere en nuchtere toediening afzonderlijk. Deze lijn werd afgebeeld in grafieken van de afzonderlijke PK-parameters (klaring, Cmax/dosis, AUC0-inf/dosis en tmax) uitgezet tegen de dosis, om zowel de dosisafhankelijkheid als de mogelijke verschillen tussen nuchtere en gevoede gelegenheden te visualiseren. De lijn werd berekend met behulp van de gerapporteerde kleinste kwadraten (bij de gemiddelde toegediende dosis: 907,5 mg) samen met de hellingen op de dosis voor de twee groepen (gevoed/gevoed). Bij afwezigheid van een significante dosis/voedsel-interactie werd het anova-model herberekend in de veronderstelling dat de interactie afwezig was en in dat geval worden de resulterende (parallelle) lijnen in de grafieken getoond.
Statistische berekeningen werden uitgevoerd met SPSS voor Windows (SPSS, Inc, Chicago, IL) en SAS voor Windows V8.1 (SAS Institute, Inc., Cary, NC, USA).
De farmacokinetische parameters werden berekend door standaard niet-compartimentele analyse met behulp van het softwarepakket WinNonlin V3.1 (Pharsight, Inc., Mountainview, CA, USA).