Przeciwciało beta-aktyna – kontrola, która ma znaczenie
beta-aktyna – białko gospodarza
Dlaczego beta-aktyna jest powszechnie stosowana jako kontrola w Western blot?
beta-aktyna i choroby ludzkie
Produkty powiązane
beta-aktyna – białko gospodarza
Aktyna jest głównym składnikiem cytoszkieletu, z sześcioma znanymi izoformami u ssaków. Cztery z tych izoform są wyrażane głównie w komórkach mięśni poprzecznie prążkowanych i gładkich, podczas gdy izoformy beta-aktyny i gamma-aktyny są wyrażane wszechobecnie. Chociaż beta-aktyna ma masę cząsteczkową 42 kDa, w wyniku degradacji powstają fragmenty o masie 35-38 kDa, ~ 30 kDa, 15 kDa i inne typowe fragmenty na Western blot, z których fragmenty o masie 35-38 kDa są najczęstsze.
Przeciwciało monoklonalne beta-aktyny firmy Steintech (60008-1-Ig) (Rysunek 1) rozpoznaje wszystkie fragmenty, podczas gdy przeciwciało 66009-1-Ig (Rysunek 2) może wykryć tylko pełną długość beta-aktyny. Beta-aktyna jest wysoce konserwatywna wśród gatunków. Jednak sekwencja N-końcowa jest mniej konserwowana wśród gatunków niż C-końcowa. Ponieważ immunogenem dla 60008-1-Ig jest sekwencja wewnętrzna, przeciwciało to może rozpoznawać szeroki zakres gatunków i może być szeroko stosowane w badaniach.
| Figura 1 | Figura 2 |
 |
 |
| Rysunek 1. Analiza immunofluorescencyjna komórek HepG2 przy użyciu 60008-1-Ig (przeciwciało beta-aktyny) w rozcieńczeniu 1:50 i koziej anty-mysiej IgG znakowanej rodaminą (czerwona). | Rysunek 2. Immunohistochemia szkiełka tkankowego ludzkiego raka okrężnicy zatopionego w parafinie przy użyciu 66009-1-Ig (przeciwciało beta-aktyny) w rozcieńczeniu 1:1000 (pod obiektywem 40x). Antygen usunięty w wyniku działania ciepła za pomocą buforu Tris-EDTA (pH9). |
Dlaczego beta-aktyna jest powszechnie stosowana jako kontrola w Western blot?
Kontrole ładunku są niezbędne do właściwej interpretacji Western blot. Mogą być używane do normalizacji poziomów wykrywanych białek poprzez potwierdzenie, że obciążenie białkami jest takie samo w całym żelu. W Western blotting, beta-aktyna (42 kDa) jest powszechnie wybierana jako kontrola załadunku ze względu na jej szeroką i spójną ekspresję we wszystkich typach komórek eukariotycznych oraz fakt, że na poziom ekspresji tego białka nie wpływa większość zabiegów eksperymentalnych (Rysunek 3).Beta-aktyna działa jako „kontrola załadunku”, aby pokazać, że bardzo podobne ilości białka zostały załadowane do każdego pasa. Jest to istotne w niektórych systemach doświadczalnych, w których nie zawsze możliwe jest zebranie dokładnie takiej samej liczby komórek dla każdej próbki, np. podczas pracy z komórkami pierwotnymi, próbkami tkanek lub systemami, w których można zmieniać syntezę białek, rozmiar/liczbę komórek lub apoptozę (1).
Rysunek 3
Rysunek 3. Analiza Western blot beta-aktyny w różnych tkankach i liniach komórkowych przy użyciu przeciwciała Proteintech 66009-1-Ig w rozcieńczeniu 1:20000 (czas ekspozycji: 10 sekund).
beta-aktyna a choroby człowieka
Beta-aktyna została zaangażowana w chorobę dłoni, stóp i jamy ustnej za pomocą proteomiki oraz chłoniaka rozlanego z dużych komórek B (3, 4).
Produkty powiązane:
| Nazwa antygenu | Katalog. No |
Zastosowanie |
PubMed |
| Aktyna alfa | 23660-1-AP | ELISA, WB, IHC, IF, IP | 5 |
| 11032-1-AP | ELISA, WB, IP | 1 | |
| 23082-1-AP | ELISA, IHC, WB | 1 | |
| alfa kardynał-aktynospecyficzny | 66125-1-Ig | ELISA, WB, IHC | 0 |
| aktyna mięśni gładkich | 14395-1-AP | ELISA, IHC, IP, WB, FC, IF | 51 |
| 23081-1-AP | ELISA, WB, IHC, IP | 5 | |
| 55135-1-AP | ELISA, IHC, WB | 4 | |
| gamma aktyna | 11227-1-AP | ELISA, WB | 0 |
| Prestained protein ladders for your WB experiments | ||
| Ready- to-use Protein Marker (Marker białkowy)gotowy do użycia marker białkowy (10-180 kDa) | gotowy do użycia marker białkowy o szerokim zakresie (3- 245 kDa) | dobry do użycia marker białkowy o szerokim zakresie245 kDa) |
| 10 wstępnie wybarwionych białek pokrywających szeroki zakres mas cząsteczkowych od 10 do 180 kDa | 13 wstępnie wybarwionych białek pokrywających szeroki mas cząsteczkowych od 3 do 245 kDa | |
 |
 |
|
| Rozdzielczość wstępnie wybarwionej drabinki białkowej w 10-20% żelu Tris-glicyna (SDS-PAGE). | Rozdzielczość wstępnie wybarwionej drabinki białkowej w 4-12% żelu Bis-Tris (SDS-PAGE) | |
Dostępne bezpłatne próbki dla markera białkowego o regularnym zakresie (10-180 kDA).