Beta-Actin-Antikörper – Eine Kontrolle, die zählt
beta-Actin – ein Housekeeping-Protein
Warum wird beta-Actin häufig als Kontrolle in Western Blots verwendet?
beta-Actin und menschliche Krankheiten
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beta-Actin – ein Housekeeping-Protein
Actin ist ein Hauptbestandteil des Zytoskeletts, mit sechs bekannten Isoformen bei Säugetieren. Vier dieser Isoformen werden hauptsächlich in quergestreiften und glatten Muskelzellen exprimiert, während die Isoformen beta-Actin und gamma-Actin ubiquitär exprimiert werden. Obwohl beta-Actin ein Molekulargewicht von 42 kDa hat, entstehen beim Abbau im Western Blot 35-38 kDa, ~ 30 kDa, 15 kDa und andere typische Fragmente, von denen die 35-38 kDa Fragmente die häufigsten sind.
Proteintechs monoklonaler beta-Actin-Antikörper (60008-1-Ig) (Abbildung 1) erkennt alle Fragmente, während der 66009-1-Ig-Antikörper (Abbildung 2) nur die volle Länge von beta-Actin nachweisen kann. Beta-Actin ist zwischen den Spezies hoch konserviert. Allerdings ist die N-terminale Sequenz zwischen den Spezies weniger konserviert als der C-Terminus. Da das Immunogen für 60008-1-Ig die interne Sequenz ist, kann dieser Antikörper eine breite Palette von Spezies erkennen und kann in der Forschung breit eingesetzt werden.
| Abbildung 1 | Abbildung 2 |
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| Abbildung 1. Immunfluoreszenzanalyse von HepG2-Zellen mit 60008-1-Ig (beta-Actin-Antikörper) in einer Verdünnung von 1:50 und Rhodamin-markiertem Ziegen-Anti-Maus-IgG (rot). | Abbildung 2. Immunhistochemie von in Paraffin eingebettetem menschlichem Darmkrebsgewebe unter Verwendung von 66009-1-Ig (beta-Actin-Antikörper) in einer Verdünnung von 1:1000 (unter 40x-Objektiv). Hitzevermitteltes Antigen wurde mit Tris-EDTA-Puffer (pH9) abgetrennt. |
Warum wird beta-Actin häufig als Kontrolle in Western Blots verwendet?
Kontrollen sind für die korrekte Interpretation von Western Blots unerlässlich. Sie können verwendet werden, um die detektierten Proteinmengen zu normalisieren, indem bestätigt wird, dass die Proteinbeladung auf dem gesamten Gel gleich ist. Beim Western Blotting wird häufig beta-Actin (42 kDa) als Beladungskontrolle gewählt, da es in allen eukaryotischen Zelltypen breit und gleichmäßig exprimiert wird und die Expressionsmengen dieses Proteins von den meisten experimentellen Behandlungen nicht beeinflusst werden (Abbildung 3). beta-Actin dient als „Beladungskontrolle“, um zu zeigen, dass sehr ähnliche Proteinmengen in jede Lane geladen wurden. Dies ist bei einigen experimentellen Systemen wichtig, bei denen es nicht immer möglich ist, die exakt gleiche Anzahl von Zellen für jede Probe zu sammeln, wie z. B. bei der Arbeit mit primären Zellen, Gewebeproben oder Systemen, bei denen Sie möglicherweise die Proteinsynthese, die Zellgröße/-anzahl oder die Apoptose verändern (1).
Abbildung 3
Abbildung 3. Western-Blot-Analyse von beta-Actin in verschiedenen Geweben und Zelllinien mit dem Proteintech-Antikörper 66009-1-Ig bei einer Verdünnung von 1:20000 (Belichtungszeit: 10 Sekunden).
beta-Actin und menschliche Krankheiten
Beta-Actin wurde durch Proteomik in die Hand-Fuß-Mund-Krankheit und das große diffuse B-Zell-Lymphom (3, 4) einbezogen.
Verwandte Produkte:
| Antigen Name | Katalog Nr |
Anwendung |
PubMed |
| alpha Actin | 23660-1-AP | ELISA, WB, IHC, IF, IP | 5 |
| 11032-1-AP | ELISA, WB, IP | 1 | 23082-1-AP | ELISA, IHC, WB | 1 |
| alpha cardiac Actin-specific | 66125-1-Ig | ELISA, WB, IHC | 0 |
| Glattmuskel-Aktin | 14395-1-AP | ELISA, IHC, IP, WB, FC, IF | 51 |
| 23081-1-AP | ELISA, WB, IHC, IP | 5 | |
| 55135-1-AP | ELISA, IHC, WB | 4 | |
| gamma Actin | 11227-1-AP | ELISA, WB | 0 |
| Festgehaltene Proteinleitern für Ihre WB-Experimente | |
| Fertigto-use Protein Marker (10-180 kDa) | Ready-to-use Broad Range Protein Marker (3-245 kDa) |
| 10 vorgefärbte Proteine, die einen breiten Bereich von Molekulargewichten von 10 bis 180 kDa abdecken | 13 vorgefärbte Proteine, die einen breiten Bereich von Molekulargewichten von 3 bis 245 kDa abdecken von 3 bis 245 kDa |
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| Auflösung der vorgefärbten Proteinleiter in einem 10-20%igen Tris-Glycin-Gel (SDS-PAGE). | Auflösung der vorgefärbten Proteinleiter in einem 4-12%igen Bis-Tris-Gel (SDS-PAGE) |
Kostenlose Proben für Regular Range Protein Marker (10-180 kDA) verfügbar.