Méthodes
Après approbation du protocole par le comité d’éthique du centre médical universitaire de Leyde, 25 sujets masculins et féminins en bonne santé (âgés de 18 à 45 ans) ont été invités à participer à cette étude exploratoire. Après avoir donné leur consentement éclairé par écrit, les sujets ont subi un examen médical complet avant de participer à l’étude, y compris un test de grossesse pour les femmes en âge de procréer. La consommation d’alcool et de xanthine a été limitée à deux unités par jour, pendant les deux jours précédant le jour de l’étude. En outre, les sujets se sont abstenus de consommer des aliments et des boissons contenant de l’alcool, de la caféine et de la xanthine 12 heures avant les jours d’étude et pendant les jours d’étude. Les femmes ont été invitées à utiliser des méthodes de contraception de barrière. Les médicaments concomitants autres que le paracétamol n’étaient pas autorisés pendant la période d’étude.
Il s’agissait d’une étude en double aveugle, partiellement randomisée, contrôlée par placebo, à dose ascendante de GPI 5693, avec des périodes de lavage minimales de 48 heures. L’étude visait à atteindre une concentration maximale (Cmax) et une aire sous la courbe de concentration (AUC) aux concentrations montrant une inversion de l’hyperalgésie dans les modèles animaux expérimentaux.
L’étude a été réalisée en panels, avec des analyses intermédiaires de la pharmacocinétique et de la sécurité pour adapter le design des panels consécutifs. Quatre sujets masculins participant au panel 1 ont reçu des doses orales à jeun de GPI 5693 de 100 mg, 300 mg et 750 mg, avec une occasion de placebo insérée au hasard. Un cinquième jour d’étude ouvert a été ajouté à ce panel pour étudier les effets de l’alimentation sur la dose de 750 mg. Après une analyse intermédiaire, les doses sélectionnées pour le panel 2 (qui comprenait également quatre sujets masculins) étaient de 300 mg, 750 mg, 1125 mg et placebo. Les analyses intermédiaires des deux premiers panels ont fourni des indications d’un effet de l’alimentation sur la pharmacocinétique du GPI 5693. La sécurité et la tolérance du médicament chez les hommes ont permis d’inclure des femmes dans un troisième panel ouvert, étudiant la tolérance et la pharmacocinétique après des doses orales uniques de 1125 et 1500 mg à l’état nourri pour les deux sexes. Aucun effet sur le SNC n’a été mesuré pendant le panel 3 qui comprenait six sujets féminins et six sujets masculins.
L’enregistrement des mouvements oculaires, le suivi adaptatif, le balancement du corps et les échelles visuelles analogiques (EVA) ont été pratiqués avant le premier jour de l’étude afin de réduire les effets d’apprentissage pendant l’étude. Le GPI 5693 a été administré sous forme de capsules de 100 mg et 375 mg après une nuit de jeûne. Pendant toutes les occasions des deux premiers panels sans interaction alimentaire, l’EEG, les mouvements oculaires, le suivi adaptatif, le balancement du corps et l’EVA ont été mesurés au départ et à intervalles de 30 minutes pendant les 2 premières heures, puis à intervalles croissants jusqu’à 8 heures après l’administration du médicament. L’ECG, les signes vitaux et les effets indésirables ont été vérifiés régulièrement et une surveillance continue de l’ECG à deux dérivations a été effectuée pendant 4 heures après l’administration du médicament. Dans la période de 24 à 48 heures après l’administration du médicament, un échantillon fécal a été prélevé pour vérifier la présence de sang occulte. Des prélèvements sanguins pour les paramètres hématologiques et biochimiques ont été effectués au départ et 24 heures après l’administration du médicament. Les prélèvements pharmacocinétiques ont été effectués toutes les 10 minutes pendant la première heure, puis à des intervalles de plus en plus rapprochés jusqu’à 48 heures après l’administration du médicament. La GPI 5693 a été mesurée par LC/MS/MS. Les concentrations plasmatiques de GPI 5693 étaient linéaires de 1 à 2000 ng ml-1 et les concentrations urinaires de GPI 5693 étaient linéaires de 10 à 2000 ng ml-1. Le CV moyen au sein du dosage était de 2,5 % et le CV moyen entre les dosages était de 1,6 %.
Les sujets sont restés sur le site de l’étude jusqu’à 24 h après chaque dosage. Un contrôle post-étude a eu lieu 48 h après leur dernier jour d’étude, y compris le suivi final de tout effet indésirable.
Les électroencéphalogrammes ont été enregistrés et analysés à l’aide du logiciel CED (Cambridge Electronics Design, Cambridge, UK), comme décrit précédemment . Les enregistrements EEG ont été réalisés à l’aide d’électrodes argent-chlorure d’argent, fixées au collodion à Fz, Cz, Pz et Oz, avec la même électrode de masse commune que pour l’enregistrement des mouvements oculaires (système international 10/20). Les résistances des électrodes ont été maintenues en dessous de 5 kOhm. Tous les enregistrements ont été effectués avec les yeux fermés des sujets. Les signaux EEG ont été obtenus à partir des dérivations Fz-Cz et Pz-Oz. Les signaux ont été amplifiés à l’aide d’un amplificateur bioélectrique Nihon Kohden AB-621G (Nihon Kohden Corporation, Tokyo, Japon) avec une constante de temps de 0,3 s et un filtre passe-bas à 100 Hz. Par session, huit blocs consécutifs de 8 s ont été enregistrés sur une période de 2 minutes. La fréquence d’échantillonnage était de 1024 Hz. Les blocs de données contenant des artefacts ont été identifiés par inspection visuelle et ont été exclus de l’analyse. Une analyse par transformée de Fourier rapide a été effectuée pour obtenir la somme des amplitudes dans les plages de fréquences delta (0,5-3,5 Hz), thêta (3,5-7,5 Hz), alpha (7,5-11,5 Hz) et bêta (11,5-30 Hz). La largeur de bande d’enregistrement totale était de 0-50 Hz.
L’enregistrement et l’analyse des mouvements oculaires saccadiques et de poursuite lisse ont été effectués avec un système basé sur un micro-ordinateur . L’équipement utilisé pour l’affichage des stimuli, la collecte et l’amplification des signaux provenait de Nihon Kohden (Nihon Kohden Corporation, Tokyo, Japon). Les mouvements oculaires saccadés ont été enregistrés pour des amplitudes de stimulus de 15 degrés de part et d’autre. Les intervalles entre les stimuli variaient de façon aléatoire entre 3 et 6 s, et 15 saccades ont été enregistrées. Les valeurs moyennes de la vitesse maximale des saccades, de la latence (temps de réaction) et de l’imprécision ont été utilisées comme paramètres. Pour les mouvements oculaires de poursuite lisse, la cible se déplaçait de manière sinusoïdale à des fréquences comprises entre 0,3 et 1,1 Hz, augmentant par pas de 0,1 Hz. L’amplitude du déplacement de la cible correspond à des rotations de 20 degrés du globe oculaire des deux côtés. Quatre cycles ont été enregistrés pour chaque fréquence de stimulus.
Le test de suivi adaptatif a été réalisé comme décrit initialement par Borland et Nicholson , en utilisant un équipement et un logiciel personnalisés (Hobbs, 2000, Hertfordshire, UK). La performance moyenne et l’écart-type des scores sur une période de 10 minutes ont été utilisés pour l’analyse. Le suivi adaptatif est une tâche de suivi de poursuite. Un cercle se déplace de façon aléatoire sur un écran. Le sujet doit essayer de maintenir un point à l’intérieur du cercle en mouvement en actionnant un joystick. Si cet effort est couronné de succès, la vitesse du cercle en mouvement augmente. À l’inverse, la vitesse est réduite si le sujet ne parvient pas à maintenir le point à l’intérieur du cercle. Les performances étaient notées après une période fixe de 10 minutes. Le test de suivi adaptatif est plus sensible à l’altération de la coordination œil-main par les drogues que les tâches de poursuite compensatoire ou d’autres tâches de suivi de la poursuite, comme le rotor de poursuite. Le test de suivi adaptatif s’est avéré utile pour mesurer les effets sur le SNC de l’alcool , de diverses drogues psychoactives et de la privation de sommeil .
L’appareil de mesure du balancement du corps permet de mesurer les mouvements du corps dans un seul plan, fournissant une mesure de la stabilité posturale. Le balancement du corps a été mesuré avec un appareil similaire à l’ataxiamètre de Wright . Avec une corde attachée à la taille, tous les mouvements du corps sur une période de temps ont été intégrés et exprimés en mm de balancement sur un écran numérique. La contribution de la vision au contrôle postural a été éliminée en demandant aux sujets de fermer les yeux. Les sujets avaient pour consigne de porter la même paire de chaussures confortables à talons bas à chaque séance. Avant de commencer une mesure, les sujets ont été invités à se tenir immobiles et à l’aise, avec leurs pieds écartés d’environ 10 cm et leurs mains dans une position détendue le long du corps. Les sujets n’étaient pas autorisés à parler pendant la mesure. La durée totale de la mesure du balancement du corps était de 2 min
Les échelles analogiques visuelles telles que décrites initialement par Norris ont été utilisées pour quantifier les effets subjectifs. A partir de ces mesures, trois facteurs ont été dérivés comme décrit par Bond et Lader , correspondant à la vigilance, l’humeur et le calme. Les effets psychédéliques ont été suivis par des échelles visuelles analogiques, traduites à partir des échelles décrites par Bowdle et al , car aucune version validée n’était disponible pour la langue et la population néerlandaises.
Toutes les variables dynamiques mesurées de manière répétée ont été caractérisées en utilisant le changement maximal par rapport à la valeur avant traitement (Emax) et en utilisant les zones sous la courbe d’effet (AUEC). Ces AUEC ont été calculées à l’aide de la règle trapézoïdale linéaire et ont été divisées par la durée correspondante, ce qui a donné un résultat moyen pondéré. Des durées nominales ont été utilisées. Les AUEC ont été calculées sur l’ensemble de la période d’échantillonnage (12 h) et sur les 6 premières heures car la plupart de la réponse est censée se produire pendant cette période.
Des statistiques descriptives ont été obtenues pour chaque paramètre pharmacodynamique. L’évolution temporelle ainsi que les paramètres dérivés ont été résumés (en utilisant les moyennes, l’écart-type (ET), min, médiane, max, n). Les paramètres pharmacodynamiques dérivés ont été analysés sans être transformés. Les paramètres EEG ont été analysés en tant que pourcentage de changement par rapport à la valeur prévalente. Ces paramètres ont été analysés, à partir des occasions de jeûne uniquement, en utilisant une analyse de variance (anova) tenant compte du sujet et du traitement.
Les paramètres indépendants de la dose (clairance, Cmax/dose, AUC0-inf/dose et tmax) ont été comparés entre les occasions de jeûne et d’alimentation en utilisant une analyse de covariance avec l’alimentation et le sujet comme facteurs, la dose comme covariable et en incluant l’interaction dose-aliment. Il en est résulté une relation linéaire prédite entre la dose et le paramètre pharmacocinétique (PK) pour l’alimentation et le jeûne séparément. Cette ligne a été représentée dans des graphiques des paramètres pharmacocinétiques individuels (clairance, Cmax/dose, ASC0-inf/dose et tmax) tracés en fonction de la dose, afin de visualiser à la fois la dépendance à la dose et les différences potentielles entre les occasions de jeûne et d’alimentation. La ligne a été calculée en utilisant les moyennes des moindres carrés rapportées (à la dose moyenne administrée : 907,5 mg) ainsi que les pentes sur la dose pour les deux groupes (nourri/à jeun). En l’absence d’une interaction significative entre la dose et l’aliment, le modèle anova a été recalculé en supposant que l’interaction était absente et, dans ce cas, les lignes (parallèles) résultantes sont indiquées dans les graphiques.
Les calculs statistiques ont été effectués à l’aide de SPSS pour Windows (SPSS, Inc, Chicago, IL) et SAS pour Windows V8.1 (SAS Institute, Inc., Cary, NC, USA).
Les paramètres pharmacocinétiques ont été calculés par analyse non compartimentale standard à l’aide du progiciel WinNonlin V3.1 (Pharsight, Inc., Mountainview, CA, USA).