Come molti test biochimici sui batteri, i risultati di un test all’indolo sono indicati da un cambiamento di colore a seguito di una reazione con un reagente aggiunto.
La coltura batterica pura deve essere coltivata in triptofano sterile o brodo di peptone per 24-48 ore prima di eseguire il test. Dopo l’incubazione, cinque gocce di reagente di Kovac (alcool isoamilico, para-dimetilamminobenzaldeide, acido cloridrico concentrato) vengono aggiunte al brodo di coltura.
Un risultato positivo è mostrato dalla presenza di un colore rosso o rosso-violetto nello strato superficiale di alcool del brodo. Un risultato negativo appare giallo. Un risultato variabile può anche verificarsi, mostrando un colore arancione come risultato. Ciò è dovuto alla presenza di skatole, noto anche come indolo metilico o indolo metilato, un altro possibile prodotto della degradazione del triptofano.
Il colore rosso positivo si forma come risultato di una serie di reazioni. La para-dimetilamminobenzaldeide reagisce con l’indolo presente nel mezzo per formare un colorante rosso rosindolo. L’alcool isoamilico forma un complesso con il colorante rosindolo, che lo fa precipitare. L’alcool rimanente e il precipitato salgono poi alla superficie del mezzo.
Una variazione di questo test con il reagente di Ehrlich (usando l’alcool etilico al posto dell’alcool isoamilico, sviluppato da Paul Ehrlich) è usato quando si esegue il test su nonfermentatori e anaerobi.
Batteri Indolo-PositiviModifica
I batteri che risultano positivi al test di scissione dell’indolo dal triptofano includono: Aeromonas hydrophila, Aeromonas punctata, Bacillus alvei, Edwardsiella sp., Escherichia coli, Flavobacterium sp., Haemophilus influenzae, Klebsiella oxytoca, Proteus sp. (non P. mirabilis e P. penneri), Plesiomonas shigelloides, Pasteurella multocida, Pasteurella pneumotropica, Enterococcus faecalis, Vibrio sp, e Lactobacillus reuteri.
Batteri indolo-negativiModifica
I batteri che danno risultati negativi al test dell’indolo includono: Actinobacillus spp., Aeromonas salmonicida, Alcaligenes sp., la maggior parte di Bacillus sp., Bordetella sp., Enterobacter sp., la maggior parte di Haemophilus sp., la maggior parte di Klebsiella sp., Neisseria sp., Mannheimia haemolytica, Pasteurella ureae, Proteus mirabilis, P. penneri, Pseudomonas sp, Salmonella sp., Serratia sp., Yersinia sp., e Rhizobium sp.
Il test Indole è uno dei quattro test della serie IMViC, che verifica la presenza di un batterio enterico. Gli altri tre test sono: il test del rosso metile, il test di Voges-Proskauer e il test del citrato.