Métodos
Após a aprovação do protocolo pelo Conselho de Revisão Ética do Centro Médico da Universidade de Leiden, 25 sujeitos saudáveis do sexo masculino e feminino (idade 18-45 anos) foram convidados a participar neste estudo exploratório. Após dar consentimento informado por escrito, os sujeitos receberam um exame médico completo antes de entrarem no estudo, incluindo um teste de gravidez para as participantes do sexo feminino com potencial de procriação. O uso de álcool e xantina foi restringido a duas unidades por dia, a partir de dois dias antes do dia do estudo. Além disso, os sujeitos abstiveram-se de álcool, cafeína e xantina contendo alimentos e bebidas 12 h antes dos dias de estudo e durante os dias de estudo. Os sujeitos do sexo feminino foram instruídos a utilizar contraceptivos de barreira. Não foi permitido medicação concomitante que não o paracetamol durante o período de estudo.
Este foi um estudo de dose ascendente duplo-cego, parcialmente aleatório, controlado por placebo, de GPI 5693, com períodos de lavagem mínimos de 48 h. O estudo visava atingir uma concentração máxima (Cmax) e uma área sob a curva de concentração (AUC) nas concentrações mostrando inversão de hiperalgesia em modelos animais experimentais.
O estudo foi realizado em painéis, com análises provisórias de farmacocinética e segurança para adaptar a concepção de painéis consecutivos. Quatro indivíduos machos participantes no Painel 1 receberam doses de GPI 5693 oral em jejum de 100 mg, 300 mg e 750 mg, com uma ocasião de placebo inserida aleatoriamente. Um quinto dia de estudo com rótulo aberto foi acrescentado a este painel para investigar os efeitos dos alimentos sobre a dose de 750 mg. Após uma análise intercalar, as doses seleccionadas para o Painel 2 (que também consistiu em quatro sujeitos masculinos) foram de 300 mg, 750 mg, 1125 mg e placebo. As análises intercalares dos dois primeiros painéis forneceram indicações para um efeito alimentar na farmacocinética GPI 5693. A segurança e tolerabilidade do medicamento nos homens permitiu a inclusão das mulheres num terceiro painel aberto, investigando a tolerabilidade e farmacocinética após doses orais únicas de 1125 e 1500 mg em estado alimentar para ambos os sexos. Não foram medidos efeitos CNS durante o Painel 3 que consistiu em seis sujeitos femininos e seis masculinos.
O registo do movimento ocular, o rastreio adaptativo, a oscilação corporal e as Escalas Analógicas Visuais (VAS) foram praticados antes do primeiro dia de estudo para reduzir os efeitos de aprendizagem durante o estudo. O GPI 5693 foi administrado em cápsulas de 100 mg e 375 mg após o jejum nocturno. Durante todas as ocasiões dos dois primeiros painéis sem interacção alimentar, EEG, movimentos oculares, seguimento adaptativo, oscilação corporal e SVA foram medidos na linha de base e a intervalos de 30 minutos durante as primeiras 2 h, e com intervalos crescentes até 8 h após a administração de drogas. ECG, sinais vitais e eventos adversos foram verificados regularmente e a monitorização contínua de ECG de duas derivações foi realizada durante 4 h após a administração de fármacos. No período de 24-48 h após a administração do medicamento, foi colhida uma amostra fecal para verificar a presença de sangue oculto. A amostragem de sangue para parâmetros hematológicos e bioquímicos foi feita no período de base e 24 h após a dosagem. A amostragem farmacocinética foi realizada a cada 10 min durante a primeira hora e com intervalos crescentes até 48 h após a administração de fármacos. O GPI 5693 foi medido por meio de LC/MS/MS. As concentrações de GPI 5693 de plasma foram lineares de 1 a 2000 ng ml-1 e as concentrações de GPI 5693 de urina foram lineares de 10 a 2000 ng ml-1. A média dentro do ensaio CV foi de 2,5% e a média entre o ensaio CV foi de 1,6%.
Subjectos permaneceram no local do estudo até 24 h após cada dose. Uma verificação pós-estudo teve lugar 48 h após o seu último dia de estudo, incluindo o acompanhamento final de quaisquer efeitos adversos.
Electroencefalogramas foram registados e analisados utilizando o software CED (Cambridge Electronics Design, Cambridge, UK), como descrito anteriormente . Os registos EEG foram feitos utilizando eléctrodos de cloreto de prata e prata, fixados com colódio em Fz, Cz, Pz e Oz, com o mesmo eléctrodo de terra comum que para o registo do movimento ocular (sistema internacional 10/20). As resistências dos eléctrodos foram mantidas abaixo dos 5 kOhm. Todas as gravações foram feitas com os olhos dos sujeitos fechados. Os sinais EEG foram obtidos a partir dos condutores Fz-Cz e Pz-Oz. Os sinais foram amplificados através da utilização de um amplificador bioeléctrico Nihon Kohden AB-621G (Nihon Kohden Corporation, Tóquio, Japão) com uma constante de tempo de 0,3 s e um filtro de baixa passagem a 100 Hz. Por sessão, foram registados oito blocos consecutivos de 8 s durante um período de 2 minutos. A taxa de amostragem foi de 1024 Hz. Os bloqueios de bases de dados contendo artefactos foram identificados por inspecção visual e estes foram excluídos da análise. A análise da transformação rápida de Fourier foi realizada para obter a soma das amplitudes nas gamas de frequência delta- (0,5-3,5 Hz), teta- (3,5-7,5 Hz), alfa- (7,5-11,5 Hz) e beta (11,5-30 Hz). A largura de banda total de gravação foi de 0-50 Hz.
Gravação e análise dos movimentos oculares sacádicos e de perseguição suave foram feitos com um sistema baseado em microcomputador . O equipamento utilizado para exibição de estímulos, recolha de sinais e amplificação foi da Nihon Kohden (Nihon Kohden Corporation, Tóquio, Japão). Os movimentos oculares sacádicos foram registados para amplitudes de estímulo de 15 graus para cada lado. Os intervalos entre os estímulos variaram aleatoriamente entre 3 e 6 s, e foram registados 15 sacádicos. Os valores médios da velocidade de pico sacádico, latência (tempo de reacção) e inexactidão foram utilizados como parâmetros. Para movimentos oculares de perseguição suave, o alvo moveu-se sinusoidal a frequências entre 0,3 e 1,1 Hz, aumentando por passos de 0,1 Hz. A amplitude do deslocamento do alvo corresponde a 20 graus de rotação do globo ocular para ambos os lados. Foram registados quatro ciclos para cada frequência de estímulo.
O teste de rastreio adaptativo foi realizado como descrito originalmente pela Borland e Nicholson, utilizando equipamento e software personalizados (Hobbs, 2000, Hertfordshire, Reino Unido). O desempenho médio e o desvio padrão das pontuações ao longo de um período de 10 minutos foram utilizados para análise. O rastreio adaptativo é uma tarefa de rastreio de perseguição. Um círculo move-se aleatoriamente em torno de um ecrã. O sujeito é instruído a tentar manter um ponto dentro do círculo em movimento, operando um joystick. Se este esforço for bem sucedido, a velocidade do círculo em movimento aumenta. Inversamente, a velocidade é reduzida se o sujeito de teste não conseguir manter o ponto dentro do círculo. O desempenho foi pontuado após um período fixo de 10 minutos. O teste de rastreio adaptativo é mais sensível ao comprometimento da coordenação olho-mão por drogas do que tarefas de perseguição compensatórias ou outras tarefas de rastreio de perseguição, tais como o rotor de perseguição. O teste de rastreio adaptativo provou ser útil para a medição dos efeitos do álcool no SNC, várias drogas psicoactivas e privação de sono .
O medidor de balanço do corpo permite a medição dos movimentos do corpo num único plano, fornecendo uma medida de estabilidade postural. A oscilação do corpo foi medida com um aparelho semelhante ao atáxiametro de Wright . Com um cordel preso à cintura, todos os movimentos do corpo durante um período de tempo foram integrados e expressos em mm de oscilação num visor digital. A contribuição da visão para o controlo postural foi eliminada ao pedir aos sujeitos que fechassem os olhos. Os sujeitos foram instruídos a usar o mesmo par de sapatos confortáveis e de salto baixo em cada sessão. Antes de iniciar uma medição, foi pedido aos sujeitos que ficassem parados e confortáveis, com os pés separados aproximadamente 10 cm e as mãos numa posição relaxada ao lado do corpo. Os sujeitos não foram autorizados a falar durante a medição. O período total de medição do balanço do corpo foi de 2 min
Escalas Analógicas Visuais, tal como descritas originalmente pela Norris, foram utilizadas para quantificar os efeitos subjectivos. A partir destas medições, três factores foram derivados como descrito por Bond e Lader , correspondendo à atenção, disposição e calma. Os efeitos psicadélicos foram monitorizados por escalas analógicas visuais, traduzidas a partir das escalas descritas por Bowdle et al. , uma vez que não estava disponível uma versão validada para a língua e população holandesa.
Todas as variáveis dinâmicas medidas repetidamente foram caracterizadas utilizando a alteração máxima do valor de pré-tratamento (Emax) e utilizando áreas sob a curva de efeito (AUECs). Estes AUECs foram calculados utilizando a regra linear trapezoidal e foram divididos pelo período de tempo correspondente, resultando num resultado médio ponderado. Foram utilizados tempos nominais. Os AUECs foram calculados durante todo o período de amostragem (12 h) e durante as primeiras 6 h porque a maior parte da resposta é esperada durante este período.
Estatística descritiva foi obtida para cada parâmetro farmacodinâmico. O curso temporal bem como os parâmetros derivados foram resumidos (utilizando médias, desvio padrão (SD), min, mediana, max, n). Parâmetros farmacodinâmicos derivados foram analisados sem transformá-los. Os parâmetros EEG foram analisados como mudança percentual em relação ao prevalecente. Estes parâmetros foram analisados, apenas a partir das ocasiões de jejum, utilizando a análise de variância (anova) contabilizando o sujeito e o tratamento.
Parâmetros independentes de dose (Clearance, Cmax/dose, AUC0-inf/dose e tmax) foram comparados entre as ocasiões de jejum e de alimentação utilizando a análise de covariância com alimentos e sujeito como factores, dose como covariante e incluindo a interacção dose-alimentos. Isto resultou numa relação linear prevista entre a dose e o parâmetro farmacocinético (PK) para alimentação e jejum separadamente. Esta linha foi representada em gráficos dos parâmetros individuais PK (Clearance, Cmax/dose, AUC0-inf/dose e tmax) traçados em relação à dose, para visualizar tanto a dependência da dose como as diferenças potenciais entre as ocasiões de jejum e de alimentação. A linha foi calculada utilizando os meios quadrados mínimos (na dose média administrada: 907,5 mg) juntamente com as inclinações na dose para os dois grupos (alimentados/jogados). Na ausência de uma dose significativa por interacção alimentar, o modelo anova foi recalculado assumindo a interacção como ausente e, nesse caso, as linhas resultantes (paralelas) são mostradas nos gráficos.
Cálculos estatísticos foram efectuados utilizando SPSS for Windows (SPSS, Inc.), Chicago, IL) e SAS for Windows V8.1 (SAS Institute, Inc., Cary, NC, EUA).
Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados por análise padrão não compartimental utilizando o pacote de software WinNonlin V3.1 (Pharsight, Inc., Mountainview, CA, EUA).