Análise genética e molecular de anticorpos anti-DNA
Análises genéticas de anticorpos anti-DNA tanto em lúpus humano como em lúpus murino forneceram informações importantes relativamente à produção de auto-anticorpos. Não há actualmente provas de que um conjunto distinto de genes associados à doença, autoreactivos da região V esteja presente apenas em indivíduos com uma susceptibilidade familiar à auto-imunidade e seja utilizado para codificar os auto-anticorpos da doença auto-imune. É também claro que não são absolutamente necessários genes específicos da região Ig V para a produção de auto-anticorpos (revisto na referência 218). Os genes de imunoglobulina presentes num animal não auto-imune são claramente capazes de formar auto-anticorpos patogénicos. Os descendentes de um rato SWR não auto-imune e de um rato NZB (ratos SNF1) produzem espontaneamente auto-anticorpos,219 com uma grande percentagem dos anticorpos anti-DNA que são depositados nos rins de ratos SNF1 tendo sido codificados por genes Ig derivados do progenitor SWR não auto-imune.219 De facto, tanto estudos idiotípicos como moleculares mostram que os genes da região V utilizados para produzir auto-anticorpos em lúpus são também utilizados numa resposta de anticorpos protectores em indivíduos não auto-imunes.220,221 Os auto-anticorpos apresentam idiótipos reactivos cruzados que também estão presentes nos anticorpos que são feitos em resposta a antigénios estranhos, e os genes da região V utilizados para codificar os auto-anticorpos também codificam os anticorpos para antigénios estranhos.222-225 De facto, uma série de auto-anticorpos reagem cruzadamente com antigénios estranhos, demonstrando que os mesmos segmentos de genes da região V podem ser utilizados tanto em respostas protectoras como potencialmente patogénicas.226-228 Estes anticorpos reactivos cruzados são capazes de se ligar a antigénios bacterianos com elevada afinidade, mas também possuem especificidade para um auto-anticorpo. Os doentes com infecções Klebsiella e os indivíduos vacinados com polissacarídeo pneumocócico desenvolvem anticorpos antibacterianos que expressam idiótipos anti-ADNA reactivos.220,229 Os anticorpos reactivos cruzados in vivo com especificidade tanto para o pneumococo como para o dsDNA são protectores em ratos contra uma infecção bacteriana de outro modo letal, mas também podem depositar-se no rim e causar danos glomerulares.230 Parece que os anticorpos reactivos cruzados são gerados rotineiramente durante o curso da resposta imunitária normal no indivíduo não auto-imune. Normalmente, porém, as células B autoreactivas que expressam uma auto-especificidade são activamente desreguladas e contribuem pouco para o repertório de anticorpos expresso.114
Embora não haja evidência de que genes específicos codifiquem apenas auto-anticorpos, alguns dados sugerem que os auto-anticorpos são codificados por um número algo restrito de genes da região da imunoglobulina V.231-233 No lúpus murino, análises extensivas de células B produtoras de anti-ADN mostram que 15 a 20 genes da região da cadeia V codificam a maioria dos anticorpos anti-ADN.165,234-236 Um estudo encontrou um aumento dramático na frequência de utilização de um determinado gene J558 de cadeia pesada em ratos auto-imunes do que em ratos normais, enquanto que os ratos não auto-imunes que foram imunizados com um complexo imunogénico de DNA/DNA ligado ao peptídeo mostraram uma utilização intermédia.233 Esta descoberta apoia o conceito de que as diferenças na utilização do gene V que podem ser observadas entre ratos auto-imunes e não auto-imunes são quantitativas em vez de reflectirem uma verdadeira diferença qualitativa. Embora os estudos moleculares de anticorpos humanos sejam mais limitados, as análises idiotípicas também sugerem um uso restrito do gene V. Esta observação é importante porque sugere que os antiidiótipos podem desempenhar um papel nas estratégias terapêuticas. Além disso, a análise de polimorfismos de comprimento de fragmento de restrição, que é uma ferramenta utilizada para identificar as semelhanças e diferenças entre genes particulares de uma população, tem sido utilizada para examinar se os polimorfismos distintos do gene Ig estão associados ao LES.237-239 Uma eliminação de um gene específico da cadeia pesada V, hv-3, foi relatada como sendo mais frequente em indivíduos com LES ou artrite reumatóide.240,241 Foi encontrado um gene específico da linha germinal Vκ, A30, para aumentar a catiicidade (e portanto a patogenicidade) dos anticorpos anti-DNA humanos. Foi encontrado um gene A30 defeituoso em oito de nove pacientes com lúpus sem nefrite, mas este gene era normal em todos os nove pacientes com lúpus com nefrite.242 O polimorfismo no locus do gene Vκ pode então contribuir para a susceptibilidade à nefrite por lúpus. Embora estes estudos analisem apenas um pequeno número de doentes, sugerem que os polimorfismos nos genes da imunoglobulina podem dar alguma contribuição para a geração de auto-anticorpos e expressão do lúpus humano. No entanto, a resposta anti-DNA não é mais restrita do que muitas respostas a antigénios estranhos, e o uso restrito do gene da região V não parece ser inclinado para famílias de genes específicas.
SHM é um mecanismo através do qual os anticorpos protectores e anti-fúngicos podem evoluir para autoanticorpos patogénicos (ver Figura 8-4).243,244 As características e mecânica da SHM no LES são, portanto, de interesse. Examinando dez anticorpos humanos positivos para um idiótipo específico, associado ao lúpus (F4), Manheimer-Lory245 não encontrou qualquer alteração na frequência de mutações somáticas ou na distribuição de tais mutações nos CDRs. Embora o processo normal de mutação somática seja geralmente aleatório, existe alguma tendência para a mutação em motivos de sequência específicos, denominados “pontos quentes” mutacionais. Surpreendentemente, os anticorpos F4-positivos mostraram uma mutação somática anormal, tal como demonstrado por uma diminuição da focalização em hot-spot. Os ratos transgénicos para o gene anti-apoptótico bcl-2 também exibem esta diminuição da focalização das mutações nos pontos quentes,246 pelo que a diminuição da focalização nos anticorpos F4-positivos derivados de doentes com lúpus pode reflectir um processo anormal de selecção de células B em vez de maquinaria defeituosa para mutação somática. Foram realizados estudos sobre o processo mutacional no repertório do gene V em células B individuais de um pequeno número de doentes com lúpus.247 A frequência de mutações foi aumentada tanto em rearranjos produtivos como improdutivos Vκ , com evidência de aumento da focalização em pontos quentes mutacionais em regiões de enquadramento, consistente com uma selecção alterada. Um único estudo em ratos não encontrou essencialmente diferenças na mutação somática entre as células B de uma estirpe autoreactiva e as de uma estirpe normal.248 Dados contraditórios impedem ainda de tirar conclusões firmes.