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Luke é mencionado pela primeira vez nas cartas de Paulo como o “colega de trabalho” e como o “amado médico”. A primeira designação é a mais significativa, pois identifica-o como um de um quadro profissional de “trabalhadores” cristãos itinerantes, muitos dos quais eram professores e pregadores. Os seus dotes médicos, como o de Paulo, podem ter contribuído para o seu sustento; mas a sua principal ocupação foi o avanço da missão cristã.
Se Lucas foi o autor do terceiro Evangelho e dos Actos dos Apóstolos, o curso e a natureza do seu ministério podem ser esboçados com mais pormenor a partir de ambos os textos. Ele exclui-se daqueles que foram testemunhas oculares do ministério de Cristo. Ele indica a participação na missão paulina pelo uso da primeira pessoa nas secções “nós” dos Actos. Sugerem que Lucas partilhou na instrução de pessoas na mensagem cristã e possivelmente na realização de curas milagrosas.
As secções “nós” são análogas em estilo a relatórios de viagens encontrados noutros escritos do período greco-romano. Eles colocam o autor com Paulo durante a sua missão inicial na Grécia – ou seja, até Philippi, na Macedónia (c. 51 ce). É lá que Lucas mais tarde se junta a Paulo e o acompanha na sua viagem final a Jerusalém (c. 58 ce). Após a prisão de Paulo naquela cidade e durante a sua detenção prolongada na vizinha Cesareia, Lucas pode ter passado um tempo considerável na Palestina a trabalhar com o apóstolo, como a ocasião o permitiu e a recolher materiais para a sua futura obra literária de dois volumes, o Evangelho e os Actos. Em qualquer caso, dois anos mais tarde aparece com Paulo na sua viagem da prisão de Cesaréia a Roma e novamente, segundo a Segunda Carta de Paulo a Timóteo 4:11, na altura do martírio do apóstolo na cidade imperial (c. 66 ce).
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Outras informações directas sobre Lucas são escassas no Novo Testamento, mas certas inferências podem ser tiradas. O estilo literário dos seus escritos e o alcance do seu vocabulário marcam-no como um homem educado. A distinção feita entre Lucas e outros colegas “da circuncisão” (Colossenses 4:11) levou muitos estudiosos a concluir que ele era um gentio. Se assim fosse, ele seria o único escritor do Novo Testamento claramente identificável como não judeu. Esta conclusão, contudo, assenta numa equação duvidosa dos “da circuncisão” com os cristãos judeus. Na verdade, a frase refere-se provavelmente a um tipo particular de judeu cristão, aqueles que observavam rigorosamente os rituais do judaísmo. Não oferece, portanto, qualquer apoio à ideia de que Lucas era um gentio. O seu conhecimento íntimo do Antigo Testamento (Bíblia hebraica) e o foco de interesse nos seus escritos favorecem, em equilíbrio, o ponto de vista de que era um cristão judeu que seguia um estilo de vida grego e era comparativamente laxista nas observâncias rituais.
Escritas da segunda metade do século II fornecem mais informações. Alguns deles – o Contra Heresias do Santo Irineu, o Prólogo Anti-Marcionita dos Evangelhos, e o Cânone Muratoriano que enumera os livros recebidos como sagrados pelos cristãos – identificam Lucas como o autor do terceiro Evangelho e Actos. O Prólogo faz a afirmação particular de que São Lucas era “um homem de Antioquia, Síria” que escreveu enquanto era “movido pelo Espírito Santo” – ou seja, como profeta. Essa interpretação recebe uma medida de apoio dos escritos de Lukan: a cidade de Antioquia figura proeminentemente em Atos, e há um interesse especial nos profetas (cristãos) contemporâneos e na profecia. Se Lucas deve ser identificado, como alguns estudiosos acreditam, com o profeta Lúcio mencionado em Actos 13:1 e com o “companheiro de trabalho” (e parente) de São Paulo na Carta de Paulo aos Romanos 16:21 é mais questionável, embora não impossível. Menos do que certo é também o comentário do Prólogo colocando a escrita do Evangelho e a morte de Lucas na Grécia; mas, em geral, é mais provável que as tradições posteriores localizem a sua obra literária em Alexandria (ou Roma) e a sua morte em Bitínia. A identificação de S. Lucas como “discípulo dos Apóstolos”, embora verdadeira num sentido geral, reflecte provavelmente a preocupação da igreja do século II em colocar todos os escritos cristãos canónicos sob um guarda-chuva apostólico. Noções posteriores de que Lucas era um dos 70 discípulos nomeados pelo Senhor, que era o companheiro de Cleofas, e que era um artista parecem ser lendárias.