Análisis genético y molecular de los anticuerpos anti-ADN
Los análisis genéticos de los anticuerpos anti-ADN tanto en el lupus humano como en el murino han proporcionado información importante sobre la producción de autoanticuerpos. Actualmente no hay pruebas de que un conjunto distinto de genes de la región V autoreactivos asociados a la enfermedad esté presente sólo en individuos con una susceptibilidad familiar a la autoinmunidad y se utilice para codificar los autoanticuerpos de la enfermedad autoinmune. También está claro que no hay genes de la región V de la Ig que sean absolutamente necesarios para la producción de autoanticuerpos (revisado en la referencia 218). Los genes de inmunoglobulina que están presentes en un animal no autoinmune son claramente capaces de formar autoanticuerpos patógenos. La descendencia de un ratón SWR no autoinmune y un ratón NZB (ratones SNF1) produce espontáneamente autoanticuerpos,219 con un gran porcentaje de los anticuerpos anti-DNA que se depositan en los riñones de los ratones SNF1 habiendo sido codificados por genes Ig derivados del progenitor SWR no autoinmune.219 De hecho, tanto los estudios idiotípicos como los moleculares muestran que los genes de la región V utilizados para producir autoanticuerpos en el lupus también se utilizan en una respuesta de anticuerpos protectora en individuos no autoinmunes.220,221 Los autoanticuerpos tienen idiotipos de reacción cruzada que también están presentes en los anticuerpos que se producen en respuesta a antígenos extraños, y los genes de la región V utilizados para codificar autoanticuerpos también codifican anticuerpos contra antígenos extraños.222-225 De hecho, varios autoanticuerpos tienen reacción cruzada con antígenos extraños, lo que demuestra que los mismos segmentos del gen de la región V pueden utilizarse en respuestas tanto protectoras como potencialmente patógenas.226-228 Estos anticuerpos de reacción cruzada son capaces de unirse al antígeno bacteriano con gran afinidad, pero también poseen especificidad para un autoantígeno. Los pacientes con infecciones por Klebsiella y las personas vacunadas con polisacáridos neumocócicos desarrollan anticuerpos antibacterianos que expresan idiotipos de reacción cruzada contra el ADN.220,229 In vivo, los anticuerpos de reacción cruzada con especificidad tanto para el neumococo como para el ADNd son protectores en ratones contra una infección bacteriana que, de otro modo, sería letal, aunque también pueden depositarse en el riñón y causar daños glomerulares.230 Parece que los anticuerpos de reacción cruzada se generan de forma rutinaria durante el curso de la respuesta inmunitaria normal en el individuo no autoinmune. Sin embargo, normalmente, las células B autoreactivas que expresan una autoespecificidad están activamente desreguladas y contribuyen poco al repertorio de anticuerpos expresado.114
Aunque no hay pruebas de que los genes específicos codifiquen sólo los autoanticuerpos, algunos datos sugieren que los autoanticuerpos están codificados por un número algo restringido de genes de la región V de la inmunoglobulina.231-233 En el lupus murino, los extensos análisis de las células B productoras de anti-ADN muestran que entre 15 y 20 genes de la región V de la cadena pesada codifican la mayoría de los anticuerpos anti-ADN.165,234-236 Un estudio descubrió un aumento drástico en la frecuencia de uso de un gen de cadena pesada J558 concreto en ratones autoinmunes que en ratones normales, mientras que los ratones no autoinmunes que fueron inmunizados con un complejo inmunogénico de ADN/ péptido de unión al ADN mostraron un uso intermedio.233 Este hallazgo apoya el concepto de que las diferencias en el uso del gen V que pueden observarse entre ratones autoinmunes y no autoinmunes son cuantitativas más que reflejar una verdadera diferencia cualitativa. Aunque los estudios moleculares de los anticuerpos humanos son más limitados, los análisis idiotípicos también sugieren un uso restringido del gen V. Esta observación es importante porque sugiere que los antiidiotipos pueden desempeñar un papel en las estrategias terapéuticas. Además, el análisis de los polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción, que es una herramienta utilizada para identificar las similitudes y diferencias entre determinados genes de una población, se ha utilizado para examinar si distintos polimorfismos del gen Ig están asociados al LES.237-239 Se ha informado de que una deleción de un gen específico de la cadena pesada V, el hv-3, es más frecuente en individuos con LES o artritis reumatoide.240,241 Se ha descubierto que un gen específico de la línea germinal Vκ, el A30, aumenta la cationicidad (y, por tanto, la patogenicidad) de los anticuerpos humanos contra el ADN. Se encontró un gen A30 defectuoso en ocho de nueve pacientes con lupus sin nefritis, pero este gen era normal en los nueve pacientes con lupus con nefritis.242 El polimorfismo en el locus del gen Vκ puede entonces contribuir a la susceptibilidad a la nefritis lúpica. Aunque estos estudios sólo contemplan un pequeño número de pacientes, sugieren que los polimorfismos en los genes de las inmunoglobulinas pueden contribuir en cierta medida a la generación de autoanticuerpos y a la expresión del lupus humano. Sin embargo, la respuesta anti-ADN no está más restringida que muchas respuestas a antígenos extraños, y el uso restringido de genes de la región V no parece estar sesgado hacia familias de genes particulares.
La SHM es un mecanismo por el que los anticuerpos protectores y antiextraños pueden evolucionar hacia autoanticuerpos patógenos (ver Figura 8-4).243,244 Las características y la mecánica de la SHM en el LES son, por tanto, de interés. Al examinar diez anticuerpos humanos positivos para un idiotipo específico asociado al lupus (F4), Manheimer-Lory245 no encontró cambios en la frecuencia de mutaciones somáticas ni en la distribución de dichas mutaciones en las CDR. Aunque el proceso normal de mutación somática es generalmente aleatorio, existe un cierto sesgo de mutación en motivos de secuencia específicos, denominados «puntos calientes» mutacionales. Sorprendentemente, los anticuerpos F4-positivos mostraron una mutación somática anormal, como lo demuestra la disminución de los puntos calientes. Los ratones transgénicos para el gen antiapoptótico bcl-2 también muestran esta disminución de la orientación de las mutaciones a los puntos calientes,246 por lo que la disminución de la orientación en los anticuerpos F4-positivos derivados de pacientes con lupus puede reflejar un proceso anormal de selección de las células B más que una maquinaria defectuosa para la mutación somática. Se han realizado estudios sobre el proceso mutacional en el repertorio del gen V en células B individuales de un pequeño número de pacientes con lupus.247 La frecuencia de las mutaciones estaba aumentada tanto en los reordenamientos Vκ productivos como en los no productivos, con evidencia de un aumento de la orientación a los puntos calientes mutacionales en las regiones marco, consistente con una selección alterada. Un único estudio en ratones no encontró prácticamente ninguna diferencia en la mutación somática entre los linfocitos B de una cepa autoreactiva y los de una cepa normal.248 Los datos contradictorios impiden sacar conclusiones firmes todavía.