Al igual que muchas pruebas bioquímicas en bacterias, los resultados de una prueba de indol se indican por un cambio de color tras una reacción con un reactivo añadido.
Los cultivos bacterianos puros deben crecer en caldo de triptófano o peptona estéril durante 24-48 horas antes de realizar la prueba. Tras la incubación, se añaden cinco gotas del reactivo de Kovac (alcohol isoamílico, para-dimetilaminobenzaldehído, ácido clorhídrico concentrado) al caldo de cultivo.
Un resultado positivo se manifiesta por la presencia de un color rojo o rojo-violeta en la capa de alcohol superficial del caldo. Un resultado negativo aparece de color amarillo. También puede producirse un resultado variable, mostrando un color naranja como resultado. Esto se debe a la presencia de skatole, también conocido como metil indol o indol metilado, otro posible producto de la degradación del triptófano.
El color rojo positivo se forma como resultado de una serie de reacciones. El para-dimetilaminobenzaldehído reacciona con el indol presente en el medio para formar un colorante rojo de indol. El alcohol isoamílico forma un complejo con el colorante de indol, lo que hace que se precipite. El alcohol restante y el precipitado suben entonces a la superficie del medio.
Una variación de esta prueba que utiliza el reactivo de Ehrlich (usando alcohol etílico en lugar de alcohol isoamílico, desarrollado por Paul Ehrlich) se utiliza cuando se realiza la prueba en no fermentadores y anaerobios.
Bacterias positivas al indolEditar
Las bacterias que dan positivo en la escisión del indol del triptófano incluyen: Aeromonas hydrophila, Aeromonas punctata, Bacillus alvei, Edwardsiella sp., Escherichia coli, Flavobacterium sp., Haemophilus influenzae, Klebsiella oxytoca, Proteus sp. (no P. mirabilis y P. penneri), Plesiomonas shigelloides, Pasteurella multocida, Pasteurella pneumotropica, Enterococcus faecalis, Vibrio sp, y Lactobacillus reuteri.
Bacterias indol negativas
Las bacterias que dan resultados negativos en la prueba del indol incluyen: Actinobacillus spp., Aeromonas salmonicida, Alcaligenes sp., la mayoría de Bacillus sp., Bordetella sp., Enterobacter sp., la mayoría de Haemophilus sp., la mayoría de Klebsiella sp., Neisseria sp., Mannheimia haemolytica, Pasteurella ureae, Proteus mirabilis, P. penneri, Pseudomonas sp, Salmonella sp., Serratia sp., Yersinia sp. y Rhizobium sp.
La prueba del indol es una de las cuatro pruebas de la serie IMViC, que comprueba la presencia de una bacteria entérica. Las otras tres pruebas son: la prueba del rojo de metilo, la prueba de Voges-Proskauer y la prueba del citrato.